網織紅細胞 Miller;窺盤法;儀器法
Key words:Reticulocyte;Miller ocular;Analyzer
網織紅細胞是骨髓最新被釋放到外周血的成熟紅細胞的前提紅細胞，同成熟紅細胞相比，其細胞內仍殘存小量的RNA（嗜堿性物質），是反映骨髓造血功能的早期指標。目前測定網織紅細胞的自動分析儀主要有：多參數流式細胞儀（FCM），某些全自動血液分析儀，如：Sysmex-R系列分析儀，Miles H3型血液分析儀，Coulter Maxm型分析儀，Abbott CD3500血液分析儀[1,2]。國內多采用顯微鏡目測法。現將Sysmex-R3500分析儀，COULTER MAXM分析儀與Miller窺盤法的測定結果進行探討。
1 材料與方法
1.1 材料
(1)SYSMEX-R3500分析儀：日本希森美康株式會社生產。原裝試劑盒和質控物，批號分別是ZA9004，11130091。(2)COULTER MAXM 分析儀：美國COULTER 公司生產。原裝試劑盒和質控物，批號分別是109155，105379K。試劑盒由試劑A與試劑B組成，其主要成分分別是0.06%新亞甲藍與0.08%硫酸。(3)Miller窺盤法的試劑盒：由TONYAR DIAGNOSTICS.INC生產的ASK BCB Solution，批號A10。成分為焦油藍4 g/L與氯化鈉9 g/L。
1.2 方法
(1)SYSMEX-R3500分析儀測定原理：熒光染料堿性槐黃（或者全胺O）（Auramine O,AO）與網織紅細胞內RNA結合，以氬激光束為光源進行測定。操作步驟：混勻血液，直接測定網織紅細胞。(2)COULTER MAXM 分析儀測定原理：血液標本與新亞甲藍孵育活體染色，加入酸性試劑，使紅細胞內的血紅蛋白溢出，保存被染色的RNA于細胞內，細胞通過測定體積，高頻傳導性以及激光散射（VCS）而進行分析，測定出網織紅細胞。操作步驟：向A管加入4滴與50 μl血液標本，混勻，室溫16℃～30℃放置5 min～60 min.取A管液體2 μl于B管，加入試劑B液2 ml，等30 s，手動進樣檢測。(3)Miller窺盤法原理：煌焦油藍活體染色法。操作步驟：見全國臨床檢驗操作規程。為了重復性好，CV值較低，本次實驗采取了計數500個紅細胞內的網織紅細胞百分數。(4)測定SYSMEX-R3500，COULTER MAXM的批內，批間精密度，并與Miller窺盤法進行比較。分別用SYSMEX-R3500分析儀，COULTER MAXM分析儀與Miller窺盤法對130份正常人標本進行網織紅細胞測定，方差分析統計結果
一位熟練的檢驗工作人員對同一標本用Miller窺盤法重復測定15次，結果如下：均值=1.177 5(0.52～1.89)，S=0.321 9，CV(%)=27.34。
2.7 用SYSMEX-R3500分析儀，COULTER MAXM分析儀，顯微鏡目測法(Miller窺盤法)同時測定130份血常規在正常范圍的標本。結果F=3.87，P<0.05，差異有顯著性。差異性分析(見表6)，相關性分析(見表7)。表6 差異性分析（略）表7 直線相關性分析（略）注：※差異無顯著性，★差異有顯著性，★★差異有極顯著性，△相關。
血 常規檢查 很重要，當人身體發生變化時，常引起 血液 質和量的變化，血液發生病理變化時，常影響全身的組織和器官。 血常規 檢查項目 有哪些呢?下面是我整理血常規檢查項目的資料，歡迎閱讀。
血常規檢查項目
1、血液分為血漿和血細胞兩部分。血常規檢查是對外周血中紅細胞和白細胞的量和質進行化驗檢查，包括：紅細胞(RBC)計數、血紅蛋白(Hb)測定，白細胞(WBC)計數及白細胞分類(DC)計數、血小板((Pt)計數。
2、在通常情況下，單位容積的血液中，紅細胞數與血紅蛋白量的數值大致呈平行的關系，故兩者測定的意義大致相同;但在某些具有紅細胞內血紅蛋白濃度改變的 貧血 ，如低色素性貧血時，紅細胞與血紅蛋白降低的程度常不平行，血紅蛋白降低較紅細胞為明顯，故同時測定紅細胞數與血紅蛋白量以作比較，對診斷就更有意義。
3、一般經多次檢查，成年男性紅細胞》6.0×1012/L、血紅蛋白》170g/L，成年女性紅細胞》5.5×1012/L、血紅蛋白》160g/L時，即被認為紅細胞和血紅蛋白增多。這種情況可分為相對性增多和絕對性增多兩類。前者是因血漿中水分丟失、血液濃縮所致，常見于嚴重嘔吐、 腹瀉 、大量出汗、大面積 燒傷 等;多引起紅細胞增多的原因，繼發性可見于高原地區居民，嚴重的慢性心、肺疾患，如阻塞性 肺氣腫 和肺原性 心臟病 ，還見于腎癌、卵巢癌以及腎孟積水、多囊腎等。原發于骨髓增殖性 疾病 如真性細胞增多癥也可引起紅細胞持續性顯著增多，紅細胞數可高達(7-10)×1012/L、血紅蛋白達180-240g/L。
4、成年男性血紅蛋白《120g/L，成年女性血紅蛋白《110g/L即可視為貧血。嬰兒從出生3個月起至15歲以下的 兒童 ，因身體生長發育迅速而紅細胞生成相對不足，紅細胞及血紅蛋白數值可較正常成人低約10%-20%;妊娠中、后期的孕婦血漿容量增加，使血液稀釋;可導致紅細胞及血紅蛋白減少，以上統稱為生理性貧血。病理性貧血見于各種貧血，如 腫瘤 、再生障礙貧血、缺鐵性貧血、巨幼細胞性貧血、失血性貧血、 白血病 、骨髓瘤、骨髓纖維化等伴發的貧血。
5、白細胞包括中性粒細胞(N)、嗜酸性粒細胞(E)、嗜堿性粒細胞(B)、淋巴細胞(L)和單核細胞(M)5種。由于各種白細胞各有其生理功能，在不同病理情況下，可引起不同類型的白細胞發生質或量的變化。
6、白細胞總數》10×109/L稱白細胞增多，淋巴細胞占白細胞總數的20%-40%。兒童期淋巴細胞較高，嬰兒出生時淋巴細胞約占35%，粒細胞占60%，4-6天后淋巴細胞可達50%;4-6歲時，淋巴細胞比例逐漸減低，逐漸達正常成人水平。淋巴細胞增多，病理性的常見于感染性疾病、淋巴細胞白血病、淋巴瘤等。淋巴細胞減少主要見于應用腎上腺皮質激素、烷化劑、抗淋巴細胞球蛋白等的治療，以及接觸放射線、免疫缺陷性疾病等。
正常人嗜酸性粒細胞占白細胞總數的0.5%-5%，其增多常見于寄生蟲感染和變態反應性疾病(如支氣管 哮喘 、藥物過敏反應等)。
7、血小板(Pt)的正常范圍為(100-300)×109/L。血小板對止血、凝血及血塊收縮均有密切關系。血小板增多(》300×109/L)，常見于慢性粒細胞白血病早期、脾切除后、急性失血、原發性血小板增多癥等。血小板減少(《109/L);如降低太多(《6×109/L)，有可能造成大出血休克或顱內出血死亡。血小板減少常見于原發性血小板減少紫癱、再障、急性白血病、脾亢、藥物中毒等。
當然，血常規檢查只是輔助性診斷方法之一，若要確診，還需要醫生結合臨床和其他相關檢測結果作出診斷。
血常規檢查方法
一般取用末梢血檢查，如指尖、耳垂部位的血。以前由于靠人工檢查分類，效率低，工作量大，又將血常規的檢查分為甲規或乙規進行，但隨著檢驗現代化、自動化的發展，現在的檢驗基本是由機器檢測，速度快，數據精確。 血常規檢查之采血
血液標本的采集及運送是保證結果的重要環節，正確的血液常規標本的采集、接收及保存，使標本中的待測成分不受影響，保證檢測結果準確可靠。 采血時凡位于體表的淺靜脈均可作為采血部位，通常采用肘部靜脈，肘部靜脈不明顯時，可用手背靜脈或內踝靜脈。幼兒可于頸外靜脈采血。采血處應避免有皮膚紅腫、潰瘍等現象。采血時如病人檢測項目多，應先采常規血，防止血小板發生聚集。止血帶壓迫時間不能過長，最好不超過0.5 min，以避免瘀血和血液濃縮(有試驗證明，壓迫時間過長，可引起纖溶活性增強，血小板釋放及某些因子活性增強，影響某些實驗結果)。最好采用封閉式真空采血器，既有利于標本的 收集 運送和保存，又便于防止血液交叉感染。抽血時避免產生大量泡沫，否則可能導致 溶血 。溶血標本會造成紅細胞計數降低，紅細胞比積降低。血液抽出后立即輕輕搖動，使血液和抗凝劑混勻，以防血液凝固。血液檢查的標本量與抗凝劑比例要合適。血液比例過高時，血漿中容易出現微凝血塊，可能阻塞血細胞分析儀，同時影響一些檢驗結果。血液比例過低，抗凝劑相對過剩，會引起血細胞形態和體積的一些改變，這些改變會使血常規檢驗得出錯誤結果。
血液標本的保存與運送
血液標本的保存與運送。血常規血液標本采集后應立即送檢，如不能及時送檢或分析，必須采取保存 措施 ，應在4 ℃~8 ℃低溫冰箱冷藏，但低溫保存不要超過4 h，保存條件非常重要，不適當保存直接影響實驗結果。標本應由檢驗人員或臨床醫護人員采集。標本運送要做到專人專送。
血常規是如何檢查的
血液檢驗以前是指血常規檢查，是 手工 操作、顯微鏡下計數的，它包括紅細胞、血紅蛋白、白細胞計數及其分類、血小板計數等，共有10來個項目。做一個病人的血常規檢驗最熟練、最快速也要10來分鐘。隨著科學技術的飛速發展， 醫學 檢驗儀器自動化，目前大部分醫院都使用自動化血液分析儀做血常規檢驗(目前稱血液學分析)。每次檢查只需用0.1毫升(約兩大滴血)的抗凝血，只要用30秒或1分鐘的時間，就可以檢測并打印出20多項結果。
如何看懂血常規化驗單
一、血紅蛋白(Hb)：
血紅蛋白是紅細胞內參與氧氣運輸的一種蛋白質，鐵、葉酸、維生素B12是其合成的重要原料。正常男性為(120～160) g/L，女性為(110～150) g/L。
血紅蛋白低于正常水平稱之為貧血，可見于多種疾病：①造血原料不足引起的缺鐵性貧血， 營養 不良性貧血。②骨髓造血功能衰竭如再生障礙性貧血。③各種急性、慢性失血所致紅細胞丟失過多如嚴重外傷失血、潰瘍病出血、月經過多、 痔瘡 或 肛裂 出血。④紅細胞破壞過多引起的各種溶血性貧血。⑤惡性腫瘤細胞侵犯骨髓，如各種白血病、骨髓瘤、骨髓轉移癌等。
血紅蛋白增高常見于： 真性紅細胞增多癥，嘔吐、腹瀉等嚴重脫水，嚴重燒傷，大量長期吸煙，慢性支 氣管炎 、肺原性心臟病，先天性心臟病，某些 腎臟疾病 ，高山地區的居民等。
如發現血紅蛋白結果異常，應注意查看是否同時伴有白細胞數、血小板及網織紅細胞數目異常，必要時應做骨髓穿刺檢查，因為這些數據對于進一步明確貧血的病因非常重要。同時應聽從血液科醫師的指導，不可自作主張亂服藥，以免延誤診治。
二、白細胞計數(WBC)及分類
血液中的白細胞俗稱“白血球”，包括中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞。化驗單中白細胞計數是指測定血液中白細胞的總數，分類是指計算上述各類白細胞的百分比。在不同的疾病狀況下，可引起不同類型白細胞